2. 核酸分子杂交法：菌落原位杂交；DNA印迹分析；RNA印迹分析；斑点印迹杂交和狭线印迹杂交

　　3. 免疫分析筛选

　　4. 限制性内切酶图谱的鉴定

　　5. 双脱氧终止法测序（Sanger法）

　　第八节　克隆基因在大肠杆菌中表达策略

　　1. 真核基因在原核细胞中表达的特点

　　2. 影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素：优化构建表达载体；影响转录水平的调控；影响翻译水平的因素；影响蛋白质水平的因素；其他因素

　　3. 真核基因在大肠杆菌中的表达类型：融合蛋白的表达；非融合蛋白的表达；蛋白分泌型表达

　　4. 表达蛋白提取、纯化和鉴定：提取；纯化；真核基因在大肠杆菌中表达产物的检测与鉴定

　　第九节　克隆目的基因在酵母中表达

　　1. 常用宿主

　　2. 酵母表达载体特点

　　3. 在酵母中高效表达外源基因的策略

　　4. 酵母表达系统的应用

　　第十节　重组原核微生物生产药物

　　1. 生产小分子药物：重组合成维生素C；重组合成抗生素

　　2. 生产蛋白类药物

　　3. 基因工程疫苗：乙肝病毒的结构；乙肝表面抗原的巴斯德毕赤酵母重组菌的构建

　　三、考核知识点

　　（一）基因工程的诞生、原理和发展

　　（二）基因工程相关的酶学

　　（三）基因工程的载体

　　（四）目的基因制备和常用分离方法

　　（五）载体DNA与目的基因的连接

　　（六）重组分子引入受体细胞

　　（七）重组体的鉴定和分析

　　（八）克隆基因在大肠杆菌中表达策略

　　（九）克隆目的基因在酵母中表达

　　（十）重组原核微生物生产药物

　　四、考核要求

　　（一）基因工程的诞生、原理和发展

　　（二）基因工程相关的酶学

　　识记：基因工程各种工具酶的生物学特性

　　领会：II型核酸限制性内切酶的基本特性

　　应用：基因工程中常用的工具酶有哪些？它们在基因工程中的用途为何？

　　（三）基因工程的载体

　　识记：载体的概念和种类

　　领会：大肠杆菌克隆载体、表达载体的结构

　　应用：试述基因工程常用载体的种类和用途。

　　（四）目的基因制备和常用分离方法

　　识记：基因克隆和分离的基本步骤；基因文库与cDNA文库的构建方法；PCR的原理。

　　领会：PCR 反应控制要点；PCR扩增的应用

　　应用：① 目的基因制备方法有哪几种，它们各自的优缺点？② 试述PCR的原理。

　　（五）载体DNA与目的基因的连接

　　识记：DNA分子间连接策略。

　　领会：影响目的基因与载体之间连接效率的因素。

　　（六）重组分子引入受体细胞

　　识记：转化、转导、转染的概念。

　　领会：重组分子引入受体细胞的常用方法。

　　（七）重组体的鉴定和分析

　　识记：重组体的鉴定的常用方法。

　　领会：双脱氧测序法的原理。

　　（八）克隆基因在大肠杆菌中表达策略

　　识记：真核基因在原核细胞中表达的特点。

　　领会：表达蛋白提取、纯化和鉴定的方法。

　　应用：影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素有哪些？

　　（九）克隆目的基因在酵母中表达

　　识记：酵母表达载体特点。

　　领会：在酵母中高效表达外源基因的策略。

　　应用：酵母表达系统在基因工程中有哪些应用？

　　（十）重组原核微生物生产药物

第三部分　有关说明与实施要求

　　一、关于考核目标

　　为了使个人自学、社会助学和考试命题有统一而明确的考核目标可遵循，本大纲在列出各章课程内容的基础上，对各章规定了学习目的和要求，并把考试内容化解成具体的考